Das Gebäude, in dem sich das Stadtmuseum befindet, wurde um 1720 erbaut und ca. 1819 zum Preußischen Zeughaus umgewandelt. Durch seine Erstürmung im Mai 1849 wurde es zentraler Ort des Revolutionsaufstandes in Iserlohn.

Die Ausstellung des Museums ist konzipiert als Rundgang. Auf 3 Etagen wird die Stadt- und Territorialgeschichte dargestellt, die in großen Teilen das protestantisch-reformierte preußische Verwaltungs-, Wirtschafts- und Militärwesen widerspiegelt.

Beim Wettbewerb „Europäisches Museum des Jahres“ wurde das Stadtmuseum bereits 1989 für die Umsetzung dieses Konzepts ausgezeichnet.

Erzgewinnung und Wasserkraft begünstigten den vorindustriellen Erfolg Iserlohns. Drahtherstellung und -verarbeitung, Messing- und Bronzeverarbeitung, die Einführung der Nadelindustrie im Zuge preußischer Wirtschaftspolitik, sowie Seiden- und Tuchhandel prägten das Leben in der Stadt. Iserlohner Kaufleute vertrieben ihre Produkte bis nach China.

Besonders bekannt sind die Iserlohner Tabaksdosen. Friedrich II. erteilte dem Kupferstecher J.H. Giese 1755 ein Monopol zur Herstellung von Tabaksdosen im Messing-Walzverfahren. Zunächst verziert mit bibl., Jagd- oder Gesellschaftsszenen sowie Stadtansichten, überwiegen während des 7-jährigen Krieges Szenen zum Ruhm Preußens. Vom 17. bis 19. Jahrhundert spiegelt die Geschichte der Stadt und ihrer Industrie die (nur zwischen 1806 und 1813 unterbrochene) Zugehörigkeit zu Preußen.

Der Sammlungsschwerpunkt des Stadtmuseums Iserlohn liegt auf der Wirtschafts- und Industriegeschichte von Stadt und Region sowie auf Exponaten, die Rückschlüsse auf die Sozialgeschichte ermöglichen.